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染色质免疫沉淀(ChIP)
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染色质免疫沉淀(ChIP)

分子蛋白平台
染色质免疫沉淀(ChIP)
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商品参数
  • 平台整体分类查询:分子蛋白平台
  • 分子蛋白平台项目:染色质免疫沉淀(ChIP)
商品描述

染色质免疫共沉淀(ChIP)是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的一种实验方法,在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,通过免疫的方法沉淀蛋白质-DNA复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,再将DNA纯化,电泳鉴定即可得到待测蛋白是否与DNNA相结合。通常用于研究某转录因子是否与某基因的启动子区结合,以探讨基因表达调控规律,对于深入研究肿瘤及心血管等疾病的发病机制具有重要意义。此外,CHIP还可以用于研究组蛋白的共价修饰与基因表达的关系。
       由于ChIP采用甲醛固定活细胞或者组织的方法,所以能比较真实的反映细胞内TF与Promoter的结合情况。这个优势是EMSA这个体外研究核酸与蛋白相互结合的实验方法所不能比拟的。当用甲醛处理时,相互靠近的蛋白与蛋白,蛋白与核酸(DNA或RNA)之间会产生共价键。细胞内,当TF与Promoter相互结合(生物意义上的结合)时,它们必然靠的比较近,或者契合在一起,这个时候用甲醛处理,能使它们之间产生共价键。     
       ChIP的一般流程是:

甲醛处理细胞——收集细胞,超声破碎——加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA复合物相互结合——加入Protein A,结合抗体-靶蛋白-DNA复合物,并沉淀——对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性结合——洗脱,得到富集的靶蛋白-DNA复合物——解交联,纯化富集的DNA-片断——PCR分析。