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Transwell 迁移实验
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Transwell 迁移实验

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商品描述

细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
       应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
Transwell小室的滤膜孔径一般为8μm，在侵袭实验中，膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel 的滤膜，这与体内情况较为相似。细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。
Transwell 细胞迁移实验步骤：
(1) 配制结晶紫染液： 取结晶紫0.05g溶于甲醇制成0.5%的结晶紫溶液，用时用PBS溶液1:5稀释成0.1%的结晶紫染液。
(2) 细胞离心：将细胞消化、离心、无血清重悬、并稀释成1×105个/ml的细胞悬液。
(3) 下室加培养基：Transwell板中加入500μl 含20% FBS的完全培养基，将小室放入板中。
(4) 上室接种细胞：在transwell小室中加入200μl 的细胞悬液，将Transwell板37℃下于CO2 （含量5%）培养箱中培养24h。
(5) 染色：将小室取出，用PBS洗去培养基，结晶紫染色10min；自来水将表面的结晶紫洗除干净，用棉签将上室中接种侧的细胞擦除干净，于显微镜下对非细胞接种侧拍照。

(6) 结果分析：每种处理随机取5个视野，进行细胞计数，以细胞数量反应细胞的迁移能力。