肠缺血是一种危及生命的疾病。动脉粥样硬化、血栓形成,低血压,坏死性小肠结肠炎,肠移植,肠道创伤和慢性炎症均可能引发肠缺血的发生。肠缺血再灌注损伤是急性肠系膜缺血的后果,主要由于经肠系膜血管血流不足所致,导致肠道损害。该模型可用于研究小肠细胞损伤和再生的分子机制。
小肠缺血再灌手术要点:
1.气麻小鼠,消毒腹部准备手术。
2.用手术剪刀在腹中线做一个3-5厘米切口。暴露肠道和肠系膜动脉。
3.用眼科剪在肠系膜周围的肠系膜动脉的两侧做小切口。轻轻抬高肠系膜位置
4.用微血管夹子夹住肠系膜上动脉的第一级分支上 做盲肠附近的回肠位置5-7cm缺血的区域,接着依次按动脉分支,阻断3-5个区域的血流。
5.手术过程中可以滴加0.5 ml肝素溶液湿润肠道,确保手术敷料湿润。
6.在低浓度气麻状态维持60分钟的局部缺血。如果缺血成功,缺血区域将在大约30分钟内变为酒红色。用苏木精染料标记缺血的位置。
7.60分钟缺血结束时,将微血管夹去除,然后轻轻地将肠子推回到腹腔内。
8.缺血肠道再灌(30 min, 60min, 120 min, or 180 min)后,安乐死处理小鼠取材,使用注射器灌满生理盐水冲去肠内容物,然后将肠道纵向切开,洗净肠内分泌物。放置固定液固定做切片染色分析。
用微血管夹诱导缺血(A)盲肠和回肠的阻断血流区域(B) (C)微血管夹在肠系膜上动脉引起局部缺血的位置。(D, E)血管结构和微血管夹的位置
组织切片包埋准备
缺血再灌后回肠的HE染色
参考文献
Gubernatorova, E.O., Perez-Chanona, E.,Koroleva, E.P., Jobin, C., Tumanov, A.V. Murine Model of IntestinalIschemia-reperfusion Injury. J. Vis. Exp. (111), e53881, doi:10.3791/53881(2016).
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