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染色质免疫沉淀（ChIP）
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染色质免疫沉淀（ChIP）

分子蛋白平台
染色质免疫沉淀（ChIP）
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商品参数
  • 平台整体分类查询:分子蛋白平台
  • 分子蛋白平台项目:染色质免疫沉淀（ChIP）
商品描述

染色质免疫共沉淀（ChIP）是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的一种实验方法，在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，通过免疫的方法沉淀蛋白质-DNA复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，再将DNA纯化，电泳鉴定即可得到待测蛋白是否与DNNA相结合。通常用于研究某转录因子是否与某基因的启动子区结合，以探讨基因表达调控规律，对于深入研究肿瘤及心血管等疾病的发病机制具有重要意义。此外，CHIP还可以用于研究组蛋白的共价修饰与基因表达的关系。
       由于ChIP采用甲醛固定活细胞或者组织的方法，所以能比较真实的反映细胞内TF与Promoter的结合情况。这个优势是EMSA这个体外研究核酸与蛋白相互结合的实验方法所不能比拟的。当用甲醛处理时，相互靠近的蛋白与蛋白，蛋白与核酸（DNA或RNA）之间会产生共价键。细胞内，当TF与Promoter相互结合（生物意义上的结合）时，它们必然靠的比较近，或者契合在一起，这个时候用甲醛处理，能使它们之间产生共价键。     
       ChIP的一般流程是：

甲醛处理细胞——收集细胞，超声破碎——加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合——加入Protein A，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，并沉淀——对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合——洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物——解交联，纯化富集的DNA-片断——PCR分析。