小鼠结肠粘膜取材

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小鼠结肠粘膜取材

来源:透明乘客 XiaLab微信公众号，仅供参考 | 作者:管理员 | 发布时间: 2018-01-07 | 22723 次浏览 | 分享到:

结肠粘膜组织分为两个区域; 增生性隐窝区和分化的表面上皮细胞。分离特定的隐窝和表面上皮细胞群以分离RNA和蛋白质研究炎症性肠病和结肠癌等疾病的发病机制。

小鼠肠粘膜取材技巧：

1.安乐死小鼠，取距肛门6厘米之间的远端结肠段。这里的隐窝深度约为150μm。纵向切开结肠并去除内容物。

2.将组织粘贴到解剖盘上，使粘膜表面朝上。在缓冲液中使用解剖针固定并来拉伸组织，放置10分钟。消除组织中褶皱，并并松弛肌肉层。

3. 用两个宽刀片将肠组织压在中间，冷冻5-10分钟压平，切去多余组织。

4.去除压片的刀片，用OCT包埋进行冰冻切片，直到观察到肠隐窝。

5.为了分析RNA或蛋白质，将具有5个隐窝基部，5个过渡区域和5个表皮细胞区域的切片分别放入试管中。分别进行不同部位细胞群的RNA和蛋白质的分离。

小鼠结肠粘膜和外部肌肉层

（A）结肠粘膜HE染色（B-C）结肠肌层（D）隐窝细胞（E）过渡细胞（F）表面上皮细胞

参考文献

Farkas, A.E., Gerner-Smidt, C., Lili, L.,Nusrat, A., Capaldo, C.T. Cryosectioning Method for Microdissection of MurineColonic Mucosa. J.Vis. Exp. (101), e53112, doi:10.3791/53112 (2015)

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