小鼠胰岛细胞的提取为了收集原代胰岛细胞，体外培养观察胰岛细胞，研究胰岛细胞的功能，探索糖尿病的机制。

在体胰腺灌注操作要点

1. 将小鼠仰卧位放置在解剖镜下，酒精消毒皮肤，从腹部耻骨到前腿做V形切口。将皮肤折叠到胸部，暴露腹腔。

2. 将鼠的头部朝向操作者，定位胆总管的十二指肠入口，用止血钳夹住十二指肠开口。阻止灌入的酶液流入至肠道。

3. 掀起肝脏暴露胆总管，使用27 G针头的注射器自胆总管灌流酶液，注意针头掰弯成70度角，缓缓灌入酶液。当2毫升的酶液充满胰腺时，十二指肠附近的区域开始首先扩张，接着是胃顶部的区域，最后是脾尾。最终使整个胰腺的均匀扩张。

4. 一旦胰腺被灌注完成，就可以将胰腺从肠，胃和脾脏周围慢慢拉出腹腔。放入50毫升锥形管中，放在冰上，不建议将灌注的胰腺放在冰上超过1小时。

胆总管和十二指肠开口

止血钳夹住胆总管的十二指肠开口

胆总管与肝脏的位置

插管胆总管

灌流酶液胰腺扩张

从离体胰腺中纯化胰岛：

1. 将胰岛置于37℃水浴锅中消化组织，消化时间按酶的批次不同进行摸索决定（如测试10、12、14、16、18分钟孵育时间）。孵育结束后，加10%血清的RPMI-1640至每管20毫升，用含血清的培养基停止消化。

2. 在10秒内剧烈摇动离心管40次来使胰岛组织破裂分离胰岛。4℃离心管800rpm离心2分钟。

3. 倒出上清液，用组织重新悬浮于15-25ml 10 % FBS培养基中，轻轻涡旋持续几秒钟摇匀。

4. 将再悬浮的组织通过直径0.419毫米钢丝网过滤倒入新鲜10% FBS培养基的50ml离心管中。4℃离心管800rpm离心2分钟。

5. 倒出上清液，加5ml室温histopaque1077（人淋巴细胞分离液）轻轻摇匀，以1ml / 10秒的速度缓慢加10ml的无血清培养基覆盖histopaque液，在histopaque和培养基之间保持清晰的界面。

6. 将样品在温度20度离心机中2400 rpm离心20分钟，慢升慢降。胰岛将迁移到培养基和Histopaque之间的界面，而外分泌细胞会沉在试管底部。可使用巴式滴管收集胰岛到含血清的培养基中。4℃离心管800rpm离心2分钟洗几次。

7. 在倒置显微镜下，在4x物镜下检查胰岛的质量，并挑出状态好的胰岛细胞进行培养。

胰岛细胞，外分泌细胞和碎片组织