一、供体肺取材手术技巧

1 .所有手术均采用无菌技术。供鼠和受体鼠均不使用抗生素。

2 .用5 %异氟烷诱导供体小鼠的麻醉。

3 .小鼠用20G静脉导管经气管插管，

4 .用1 - 2 %异氟烷维持麻醉。

5 .供体小鼠置于仰卧位，用75 %酒精颈胸部消毒。

6 . 做中线和横向切口进行开腹手术。

7 .将100 u / kg肝素从肝脏正下方注入下腔静脉( IVC )。

8 .从横膈沿肋腹侧附着处向脊柱做切口，暴露胸腔

9 .在隔膜水平切断IVC后，切开右心耳并通过右心耳用2ml冷却乳酸林格溶液灌洗肺，通过肺动脉( PA )干根部的横向切口注射0.1 ml肝素。

10 .将心肺切下来并放在冰上。

11 .供体左肺通过连接袖口为受体手术准备。切除肺韧带直到肺静脉( PV )。切除食管和主动脉，暴露肺门。

12 .确定位于肺门颅面的支气管动脉，以及附着的主支气管(Br)。仔细地从

支气管分离支气管动脉。

13.支气管动脉袖口由24号静脉导管制成，并切割成0.5mm-0.7 mm长。

14 .然后磨圆滑袖带的整个表面以便于吻合。

15.支气管的袖口由20号静脉导管制作，长度为0.7mm -1.0 mm长。

16 .袖带插入PA、PV和Br的远端，并用9 - 0缝合线固定。

17 .供体肺用无菌肝素和无菌盐水洗涤。然后用无菌材料浸湿无菌盐水包裹供体肺，使肺保持干净和无菌。

18.在支气管上放置微血管夹以防止乳酸林格溶液进入气道。

二、肺移植至受体手术技巧

1 .气体麻醉。

2 .将左胸壁剃毛，用75 %酒精消毒。

3 .在左侧第三肋间做开胸切口，该切口背侧靠近脊柱，并用微血管夹邻近心脏位置夹紧左肺血管和支气管，。可以在颅面看到PA，肺门尾端看到PV。

4 .用牵引止血钳，使PA、Br和PV产生温和的张力，将中央肺门夹紧，同时将左肺从胸腔中拉出。

5 .通过钝性解剖分离PA、PV和Br，然后将9 - 0缝合线松弛地放置在PA、PV和Br周围。

6 .在将PA完全从其外膜鞘中分离出来之后，在大约四分之一血管处做小横向切口。

7 .然后将供体肺放置在胸腔中，供体肺袖口插入受体PA、PV和Br，并用9 - 0缝合线固定。

8 .去除肺门微血管夹，使血液灌注和通气。

9 .将移植肺放回受体胸部后，使用5 - 0缝合线缝合胸壁切口。

移植后急性排斥反应和闭塞性细支气管炎（OB）发生率的组织学评分

肺移植术后28天的大体和组织病理学观察。

A移植正常肺HE染色

B C57BL / 10- C57BL / 6 肺移植发生闭塞性细支气管炎（OB）肺HE染色和Masson染色

C C57BL / 10- C57BL / 6 肺移植无闭塞性细支气管炎（OB）肺HE染色和Masson染色

D C57BL / 6- C57BL / 10 肺移植后肺HE染色和Masson染色

Suzuki, H., Fan, L., Wilkes, D.S.Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic LungTransplantation. J. Vis.Exp. (65), e3947, doi:10.3791/3947 (2012).