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实验用大小鼠体内及体外寄生虫检测
来源: | 作者:莱艾特科技 | 发布时间: 2021-01-03 | 2354 次浏览 | 分享到:
大小鼠体内和体外寄生虫检测仍然是实验室动物动物房防疫的重要措施。通过取材自活体或安乐死的技术检测被污染的动物的样本,可能可以检测到寄生虫。本文演示了检测小鼠和大鼠体内和体外寄生虫的技术过程。

 



体内寄生虫检查
1.肛周胶带测试
(1)将透明,不结霜的玻璃纸胶带粘贴在鼠的会阴处以及肛周区几次。可以看到有毛发粘贴到胶带上。
(2)将一滴甘油滴到干净载玻片上,将胶带贴在载玻片上,然后再滴上一滴甘油用,用盖玻片封片。
(3)可使用光学显微镜上的10倍和40倍物镜观察载玻片。肛周胶带测试最适合检测鼠蛲虫卵。
2.粪便浮选
(1)从鼠笼中收集2-5个粪便颗粒或将新鲜粪便放到1.20-1.30的比重浮选溶液中。如果粪便非常干燥,可用500ul生理盐水润湿粪便。
(2)将浮选瓶中粪便溶液搅拌均匀。继续添加浮选溶液,直到浮选瓶的瓶口边缘。
(3)将盖玻片放在浮选瓶口室温下孵育15分钟。寄生虫卵和一些原生动物卵囊会粘附在盖玻片上。孵育后,提起并翻转盖玻片。将盖玻片放在玻璃载玻片上。
(4)在显微镜下使用10x和40x物镜检查载玻片。该技术含量低且易于操作适合于产生大量粪便的动物。
3.粪便浓缩和离心
(1)从鼠笼中收集2-10个粪便颗粒或将新鲜粪便放到1.18-1.30的比重溶液中。如果粪便非常干燥,可用500ul生理盐水润湿粪便。
(2)将样品混合在玻璃离心管内的溶液中。用旋涡器进行搅拌混合。在约616-760RCF下离心10分钟,用盖玻片在放置在样品管上,并且可以轻轻地倾斜管,使液面接触盖玻片。
(3)从离心管上取出盖玻片,并放置在载玻片上,用碘染色载玻片。这可以更容易识别囊肿。
4.直接检查肠道蠕虫和原生生物。
(1)将安乐死的小鼠或大鼠。暴露腹腔,从十二指肠开始取出肠子,肠段开始于胃的出口并到降结肠直到肛门结束。
(2)将肠放入100毫升培养皿中。取一部分盲肠和十二指肠,并将其置于解剖板。切开每个肠段并纵向暴露肠粘膜。
(3)用剪刀将剩余的肠切成小块,将样品混合物在35-40℃下在实验室烘箱或培养箱中孵育至少10分钟。这将暴露官腔寄生蠕虫。
(4)将十二指肠和盲肠分别置于载玻片上,刮下十二指肠黏膜和盲肠粘膜,将置于在载玻片上可方便观察。
体外寄生虫检查
1.体外寄生虫毛皮检查(胶带试验)
(1)将透明,不结霜的玻璃纸胶带粘贴在鼠的肩胛区、腹颈区、腋腹股沟区、腹股沟区和后臀。可以看到有毛发粘贴到胶带上。
(2)将一滴甘油滴到干净载玻片上,将胶带贴在载玻片上,然后再滴上一滴甘油用,用盖玻片封片。
(3)可使用显微镜10倍和40倍物镜观察载玻片。可检测到皮毛螨,如桡足螨、肌螨和肌螨等。
2.皮肤刮伤取样
(1)麻醉动物,在鼠尾部和头部颞区附近取样。或者在皮肤损伤处取样。
(2)用手术刀刀片沿毛发生长的相反方向深深刮伤皮肤
(3)在载玻片上滴一滴甘油,将样品涂抹到载玻片上,并盖上盖玻片。皮肤刮伤取样通常用于检测蠕形螨和皮肤癣菌。
3.直接检测毛发
(1)安乐死小鼠或大鼠。
(2)用涂抹棒或类似仪器检查颅区,眼睛和耳廓之间,耳廓之间,肩胛骨之间,下颌下和腹股沟和腋窝区域毛发。
(3)使用小钳子取样观察到的任何体外寄生虫或可疑物质。体外寄生虫通常看起来像皮屑或黄色蜡质堆积在毛干底部或直接堆积在皮肤上。
(4)将样品涂抹在干净的载玻片上,封片显微镜下观察。
参考文献
Parkinson,C.M.,O'Brien,A.,Albers,T.M.,Simon,M.A.,Clifford,C.B.,Pritchett-Corning,K.R.DiagnosisofEcto-andEndoparasitesinLaboratoryRatsandMice.J.Vis.Exp.(55),e2767,doi:10.3791/2767(2011).
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